Investigación
Caracterización de receptores de superficie expresados en células dendríticas y otras APCs porcinas
Hemos caracterizado varios miembros de la familia de receptores lectina-tipo C porcinos. Para ello, generamos líneas celulares que expresan de manera estable las formas solubles o asociadas a membrana de los homólogos porcinos de CLEC4A, CLEC12A y CLEB12B. Obtuvimos anticuerpos monoclonales frente a dichas moléculas y analizamos su distribución en diferentes subpoblaciones leucocitarias. CLEC12A y CLEC12B se expresan únicamente en DC sanguíneas y en algunas poblaciones de macrófagos tisulares. Monocitos, granulocitos y linfocitos no expresan dichos receptores.
También hemos generado anticuerpos y sus fragmentos scFvs específicos frente a CD163 y Siglec-1/CD169. Estos receptores se expresan en poblaciones de macrófagos localizados en el seno subcapsular de los ganglios linfáticos, en la zona marginal del bazo, y en algunas subpoblaciones de DC. Dichos macrófagos están especializados en la captura de antígenos presentes en la linfa y sangre.
Todos estos anticuerpos podrían ser útiles para diseñar vacunas basadas en la dirección de antígenos a APCs, como estrategia para aumentar la inmunogenicidad del antígeno. En este sentido, hemos demostrado que la unión de los anticuerpos anti-CD163, anti-Siglec-1/CD169 y anti-CLEC12A a sus células diana lleva a la internalización de los mismos. Además, los cerdos inoculados con dichos anticuerpos muestran una respuesta humoral frente a las Ig de ratón más intensa que los animales control, inmunizados con un anticuerpo irrelevante del mismo isotipo.
Estudio de la permisividad de las subpoblaciones de monocitos de médula ósea a la infección causada por el PRRSv
La médula ósea contiene dos subpoblaciones de monocitos, una de las cuales expresa CD163 y Siglec-1/CD169, dos receptores involucrados en la entrada y replicación del virus del Síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSv) en macrófagos. Hemos analizado la permisividad de estas células a la infección por el PRRsv demostrando que dicho virus replica eficientemente en los monocitos CD163+ alcanzando títulos similares a los generados en macrófagos alveolares, la célula diana del virus. La infección de estos monocitos puede contribuir a la persistencia del virus en los animales infectados y a la aparición de alteraciones hematológicas en los mismos.
Expresión de Siglecs en DC sanguíneas, de bazo y ganglios linfáticos
Las células del sistema inmune expresan en su superficie diversos receptores, denominados Siglecs, que pueden modular su activación, a través de la interacción con ácidos siálicos presentes en otras células o patógenos. Hemos analizado la expresión de Siglec-1/CD169, Siglec-3, -5 y -10 en subpoblaciones de células dendríticas convencionales (cDC), de sangre, bazo y ganglios linfáticos porcinos. Siglec-3 y Siglec-5 se detectaron en cDC1 y, a niveles más altos, en cDC2 en todos los tejidos analizados. Por otro lado, Siglec-1 se expresa en cDC1 y, a nivel más bajo, en cDC2 esplénicas, no detectándose en las células localizadas en otros tejidos. No se detectó la expresión Siglec-10 en las cDCs de ninguno de los tejidos analizados.
Caracterización de los homólos porcinos CD200R1 y CD200R1L
CD200R1 and CD200R1L son receptores pareados que modulan la activación de las células del sistema inmune, impidiendo que una respuesta inflamatoria excesiva pueda tener efectos perjudiciales para el huésped. Algunos patógenos se aprovechan del papel regulador de estas moléculas para reducir la respuesta inmune generada frente a ellos y de este modo facilitar su supervivencia.
Hemos caracterizado los homólogos porcinos de CD200R1 y CD200R1L y analizado su distribución en diferentes poblaciones de leucocitos porcinos, empleando anticuerpos monoclonales desarrollados por nuestro grupo. Estos receptores se expresan en monocitos, macrófagos y células B. En estas últimas hemos observado que su expresión está muy regulada, detectándose dichos receptores únicamente en células efectoras/memoria y en plasmablastos. Además, hemos demostrado que modulan la producción de anticuerpos inducida por el ligando de TLR-7 imiquimoid. El análisis de la heterogeneidad de estas poblaciones de células B y del papel que juegan los receptores CD200R1 y CD200R1L regulando su activación, pueden contribuir a una mejor comprensión de la generación de las células B de memoria en el cerdo, con importantes implicaciones en el desarrollo de mejores estrategias vacunales.